Silençage génique de l'ARNm codant pour l'apolipoprotéine B après administration par voie intraveineuse de nanoparticules chitosane/siARN-ApoB dans un modèle murin d'athérosclérose

L'athérosclérose est une maladie inflammatoire auto-suffisante dont le développement progressif asymptomatique mène à la majorité des maladies cardiovasculaires causant approximativement 75 000 décès par année au Canada seulement. L'apolipoprotéine B (ApoB) est une composante structurelle essentielle des lipoprotéines de faible densité (LDL), responsables de l'initiation et du développement de l'athérosclérose. Les médicaments actuels ne font que ralentir le développement athérosclérotique au lieu d'atteindre la source du problème qui est principalement l'ApoB. D'où l'importance de trouver une nouvelle avenue biomédicale telle que le silençage génique de l'ApoB en utilisant un système conçu pour livrer systémiquement des petits ARN interférents (siARN) et pour les libérer dans des cellules « cibles ». Nous avons donc pour hypothèse de recherche que l'administration par voie intraveineuse des nanoparticules chitosane/siARN-ApoB est en mesure d'induire des effets thérapeutiques sécuritaires dans un modèle murin d'athérosclérose. Le chitosane est un polymère cationique, naturel et biodégradable dont les caractéristiques intrinsèques varient en fonction de son degré de désacétylation (DD) et sa masse moléculaire (MM). De plus, le ratio amine de chitosane : phosphate de siARN (N:P) utilisé pour former les nanoparticules, ainsi que le DD et la MM du chitosane influencent grandement les caractéristiques physico-chimiques des nanoparticules. Les formulations de chitosane (DD-MM-N:P) utilisées dans le cadre de ce projet, soit le 92-10-5, le 80-80-5 et le 80-10-10 ont été préalablement évaluées en thérapie génique. Les analyses par microscopie électronique à balayage environnemental (ESEM) et par diffusion dynamique de la lumière (DLS) ont démontré que les nanoparticules chitosane/oligonucléotides double brin (ODNdb)-ApoB sphériques et homogènes possèdent des tailles et des potentiels zêta (δ) variant entre 41 et 108 nm et entre 15 et 23 mV, respectivement. L'électrophorèse sur gel de polyacrylamide a démontré la stabilité des nanoparticules chitosane/ODNdb-ApoB formées de chitosane 92-10 à divers ratios N:P lors d'incubation à différentes périodes dans des solutions de pH différents. Nous avons également démontré par électrophorèse sur gel d'agarose que le chitosane est en mesure de protéger efficacement les ODNdb-ApoB contre la dégradation à des concentrations supra-physiologiques de désoxyribonucléases I (ADNase I) (2 unités d'ADNase I/μg d'ODNdb).