Silençage du gène ApoB codant pour l'apolipoprotéine B responsable de l'athérosclérose, in vitro et in vivo, à l'aide des nanoparticules chitosane/siARN-ApoB

L'athérosclérose est une cause sous-jacente des maladies cardiovasculaires. Le nombre de décès causés par ces maladies est estimé à 17,3 millions soit 30% de la mortalité mondiale totale. L'apolipoprotéine B (ApoB) joue un rôle important dans l'initiation de l'athérosclérose. En fait, c'est le précurseur des lipoprotéines à faible densité (LDL) responsables de l'activation de l'athérosclérose quand ils s'infiltrent dans l'espace sous-endothélial et s'oxydent. La réduction de l'ApoB dans le sang diminue le risque de l'athérosclérose. L'utilisation des siARN est prometteuse pour silençer le gène ApoB et pour prévenir la maladie. Toutefois, les siARN sont facilement dégradables dans le sang. Ce qui peut diminuer leur efficacité. Le chitosane, un polymère cationique naturel et biodégradable, peut servir comme un système de livraison des siARN jusqu'à l'intérieure des cellules cibles. Le chitosane est caractérisé par ses propriétés physicochimiques notamment le DDA, la MM et le ratio N : P. La formulation du chitosane est écrite comme suit : DDA-MM-N : P. Dans notre étude, les formulations utilisées sont 80-10-5, 80-40-5, 92-10-5 et 92-40-5. De plus, nous avons choisi trois siApoB modifiés ou non modifiés chimiquement. Les 12 nanoparticules ont été testées à fin de sélectionner la moins toxique et la plus efficace. Le diamètre des nanoparticules tel que déterminé par DLS varie entre 71 et 135 nm. Les nanoparticules formées de chitosane et des siApoB qui contiennent le plus de modifications chimiques 2'-O-méthylation et des liaisons phosphotioates sont de plus grandes tailles. L'ESEM montre que les nanoparticules sont sphériques et confirme que les siApoB modifiés forment avec le chitosane des nanoparticules de taille plus grande que les nanoparticules chitosane/siApoB non modifiés. Le potentiel ζ des nanoparticules est positif et varie entre +19 et +31 mV. Le test de stabilité démontre que le chitosane peut former des nanoparticules stables à pH 6,5 avec tous les siApoB. Le test de cytotoxicité AlamarBlue® montre que les nanoparticules chitosane/siApoB sont moins toxiques que les nanoparticules à base de l'agent commercialisé de transfection DharmaFECT® complexé avec les siApoB. La microscopie confocale prouve que les nanoparticules chitosane/siApoB sont capables de franchir la membrane cellulaire et l'endosome pour libérer les siApoB dans le cytoplasme des cellules HepG2. La cytométrie en flux montre que le chitosane 92-40-5 complexé avec les siApoB modifiés et non modifiés transfecte mieux les cellules HepG2 que DharmaFECT® complexé avec les mêmes siARN. La qRT-PCR démontre que les nanoparticules 92-40-5/siApoB et 92-10-5/siApoB peuvent induire un silençage de plus